本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108 cfu/ug,-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
每支感受态可以根据试验情况酌情分装使用,降低实验成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。
DH5α菌株介绍
一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80,IacZ∆M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。RecA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
操作步骤
(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100 μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻弹混匀,在冰浴中静置30min。
3、 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3min,该过程不要摇动离心管。
注意:此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需十分准确,夏季或室温较高时,可放置5-8min左右,如果室温较低,可延长时间至8-15min左右。条件允许建议使用42℃热激方法。
4、 向每个离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养45min(150rpm),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5、 将离心管内容物混匀,吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻地将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16h。
注意事项
1、感受态细胞应保存在-80℃,不可冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。