TOP10感受态细胞


  • 储存: -80℃
  • 货号: ERC002
  • 规格: 10×100μL
  • 价格: 118

本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/ug-80℃保存几个月转化效率不发生改变。

每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。

TOP10菌株介绍

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增。能保证高拷贝质粒的稳定复制。其φ80,IacZ∆M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。

操作步骤

以下操作均按无菌条件的标准进行)

1、  取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。

注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。

2、  向感受态细胞悬液中加入目的DNA100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻弹混匀,在冰浴中静置30min

3、  将离心管置于42℃水浴中放置60-90sec,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3min,该过程不要摇动离心管。

注意:此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需十分准确,夏季或室温较高时,可放置5-8min左右,如果室温较低,可延长时间至8-15min左右。条件允许建议使用42℃热激方法。

4、  向每个离心管中加入900μl无菌的SOCLB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床振荡培养45min150rpm),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5、  将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOBLB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻地将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16h

注意:涂布用量可根据实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4000rpm2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中(涂布剩余的菌液可置于4保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩余的菌液再涂布新的培养平板)

注意事项

1、  感受态细胞应保存在-80不可冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。

2、  进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3、  为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。